Jak se vyhnout běžným nedorozuměním při používání nízko vázaných pipetových tipů?

TIPY PIPETTY Nízko vázání může významně snížit zbytky vzorku v důsledku jejich hydrofobního návrhu vnitřního povrchu a jsou zvláště vhodné pro manipulaci s drahými činidly, viskózními kapalinami nebo stopovacími vzorky (jako jsou proteiny a nukleové kyseliny). Pokud však nejsou správně provozovány, mohou stále ovlivnit přesnost a opakovatelnost experimentu. Následuje analýza běžných chyb a řešení používaných v kombinaci s laboratorními operačními specifikacemi:

Nedocházení 1: Ignorování předběžného oplachování špičky

Špatná operace: Přímo aspirujte vzorek a vynechejte krok před opláchnutím.

Dopad: Ačkoli nízko vázající špičky pipety mohou snížit zbytky, u vzorků, jako jsou sérové, protein nebo organická rozpouštědla, mohou jejich vnitřní stěny stále tvořit mikropřídní film kvůli povrchovému napětí, což má za následek nízký počáteční objem pipety.

Správný přístup: Před formálním pipettingem opakujte aspirační vybírání 2 až 3krát se stejným vzorkem a vytvoří stabilní vrstvu kapaliny na vnitřní stěně špičky (s výjimkou tekutin s vysokou teplotou/nízkou teplotou).

Nedocházení 2: Rychlost aspirace je příliš rychlá nebo je nakloněn úhel

Špatná operace: Rychle aspirujte kapalinu nebo je pipeta nakloněna o více než 20 °.
Dopad:

Pipette příliš rychle: bubliny nebo zpětné sací (tekutina se vrhá do pipety a kontaminuje píst);
Pipette nakloněné: mění povrchový tlak kapaliny, což má za následek nepřesné objem pipety a zvýšený zbytkový objem. Správný přístup:
Pipette pomalu a uvolňte pomalu: Provozujte konstantní rychlostí a ovládejte rychlost uvolňování pístu;
Držte svisle: Udržujte úhel náklonu ≤ 20 °, když je špička pipety ponořena do povrchu kapaliny.
Nedocházení 3: Ignorování provozních rozdílů viskózních kapalin
Nesprávná provoz: Použijte stejnou rychlost pipetů jako běžné kapaliny pro vzorky s vysokou viscozitou (jako jsou glycerol a suspenze buněk).
Dopad: Viskózní kapaliny pomalu teče na vnitřní stěně špičky pipety a rychlý výboj způsobí významné zvýšení zbytkového objemu, čímž se vyrovná výhody nízké adsorpční návrhu.
Správný přístup:

Prodloužte dobu ponoření: Po aspiraci zůstaňte na povrchu kapaliny na 1 sekundu před jeho odstraněním a před stisknutím druhého rychlostního stupně se při vybití vyfukujte druhé rychlostní stupeň;
Vyberte špičku pipety širokého ústa: pro makromolekuly nebo vzorky buněk použijte špičku s nízkou adsorpční pipetou s širokým územ (o 70% větší než standardní clona), abyste snížili smykovou sílu.
Mylná představa 4: Při instalaci tipu tvrdé zasažení
Špatná operace: Opakovaně zasáhne rukojeť pipety, aby „utáhla“ špičku.
Účinek: Dlouhodobý dopad bude nosit komponenty těsnění pipety, zničit vzduchotěsnost a způsobit chybu úniku nebo objemu.
Správná metoda: Vložte pipetu svisle do špičky, lehce stiskněte a mírně otočte doleva a doprava, aby se vešly.

Myšlenka 5: Nesprávné úložiště nebo opětovné použití
Špatná operace:

Umístěte pipetu plochou, když je ve špičce zbytková kapalina;
Opětovné použití jednorázových tipů s nízkou adsorpcí k úspoře nákladů. Dopad:
Umístění plochého způsobuje, že zpětný tok kapaliny koroduje pístovou pružinu;
Opětovné použití může ovlivnit přesnost v důsledku křížové kontaminace nebo strukturální deformace. Správná metoda:
Zlikvidujte špičku ihned po pipetu a pipetu zavěste svisle;
Opětovné použití je přísně zakázáno, zejména pokud jde o citlivé experimenty, jako jsou PCR a izotopy.
Profesionální rada: Maximalizujte výhody tipů s nízkou retencí
Odpovídat vlastnostem kapalin:
Těkavé kapaliny (jako je chloroform): Vyvarujte se používání běžných tipů s nízkou retencí a používejte špičky bezpečného na solventu nebo externí pístové pipety určené pro těkavé činidla.
Ověření kalibrace:
Pravidelně váží hmotnost čisté vody pipetovanou analytickou rovnováhou (1 ml = 0,9982 g při 20 ℃), aby se ověřila, zda skutečný objem splňuje standard.
Shrnutí klíčových bodů: TIPY s nízkou retencí zlepšují přesnost snížením ztráty vzorku, ale pokud jsou podrobnosti operace ignorovány, může být stále kontraproduktivní. Standardizovaná instalace, řízení rychlosti, přizpůsobení charakteristikám vzorku a přísné jednorázové použití jsou základem pro dosažení experimentů s vysokou opakovatelností.